在论坛改版前，我曾经贴过一个”超级子吹”乌羽玉，是我的一个实验品。大家对这个东西很感兴趣，很多朋友问我他是怎么弄出来的，想自己尝试一下；也有朋友要花重金买，等等。其实这个东西只是一种化学诱变的产物，类似的“恶作剧”还可以做很多，也不仅局限于乌羽玉这个品种。目前我的那个“超级子吹”已经送给了一位前辈，我又为其他几位需要的前辈朋友繁殖一些，基本上“超级子吹”算是能够保留下来了。但是说实话，这个东西稳定性有多高，我也不敢确定。但估计在嫁接的条件下，能够维持10年以上，2代以内。
下面我就把整个诱变的过程和机理的探讨写出来，供大家参考：


“超级子吹”乌羽玉的诱变过程和机理分析


诱变过程：

1.工作液a：kt 10ppm + naa 1ppm + dmso 1ppm (ph=5.8, 0.01m tris-buffer)
工作液b：6ba 5ppm + kt 5ppm + dmso 1ppm (ph=5.8, 0.01mtris-buffer)
工作液c：licl 1% + dmso 5ppm (ph=5.8 ,0.01mtris-buffer)
工作液d：naa 1ppm + ccc 1ppm + kh2po4 0.1% (ph=5.8 ,0.01mtris-buffer)

2.嫁接准备： 砧木选择：采用易出子球的仙人球属品种，如：短毛丸等。
接穗选择：采用直径〈1cm的乌羽玉。
平接成活后，自然生长1个月，等待生长点附近有较多的新生组织产生后，放至于光照度2000lx左右的环境中。

3.初诱导：给1/10 a液作为日常管理的水分，每3天喷雾一次，持续10次。

4.加强诱导：采用 a液表皮喷施，每次总用量不超过10ml，每7天一次，持续3次。

5.初诱变：采用b液替换a液，每7天喷施一次，持续2次。

6.诱变：采用c液作表皮涂布，没用量小于2ml ;和a液间隔使用，每7天一次，直到有大量子球出现为止。

7.加强诱变：采用1/10 a液连续喷施2个月，直到子球发生率下降为止。

8.稳定遗传性：采用 d液每间隔7天浇灌，共 3次，每次少于50ml；此后用1/10d液连续浇灌1~2个月，使得子球重新大量发生为止。此时采用dna电泳监测将出现明显的遗传带。

9.正常管理：加强光照和湿度。

10.诱变稳定率：<10%


机理分析：

1. 药物介绍：
kt：激动素，6-呋喃氨基嘌呤。一种重要的细胞分裂素，能够刺激细胞向芽分化和抑制衰老，促进细胞大量分裂，细胞体积减小，体液浓缩。

6-ba：6-苄氨基嘌呤。人工合成的重要细胞分裂素，其效用比kt强，除具有kt效应外，还可以增强细胞通透性和营养物质的运输，为诱变剂的渗入奠定了基础。

naa：生长素，1-萘乙酸。一种重要的生长调节剂，促进细胞向根分化，正向协同细胞分裂素物质，促进细胞伸长，使液泡增大。

licl：氯化锂，一种重要的无机诱变剂，作为转录阻滞剂参与蛋白质的合成，通过顺式作用元件作用于dna，使之形成基因增强子或者启动多拷贝基因，从而产生诱变效应。

dmso：二甲基亚砜，一种万能溶剂，协调植物表皮对激素或者诱变剂的渗入，但浓度过高会诱导细胞质遗传缺陷，产生玻璃化效应。

ccc：矮壮素，促进植物淀粉积累，避免生长素产生的徒长效应。

kh2po4：磷酸二氢钾，一种营养物质，在细胞大量分裂期和代谢调节期尤为重要。

ph=5.8, 0.01m tris-buffer：三羟甲基氨基甲烷缓冲液，稳定ph值。在诱变过程中，ph的改变对细胞的损伤是相当大的。该溶液亦可以采用巴比妥缓冲液。

2. 砧木和接穗的选择：
之所以采用易生子球的仙人球属品种，原因有三：第一，仙人球属的植物做砧木，能够在一定程度上缓冲营养成分的供应，使得营养成分比较均匀的供给到接穗当中，不至于产生营养—激素失衡反应的出现。选择易出子球的砧木，目的是加强诱导效应，因为易出子球的植株内源细胞分裂素物质丰富，对接穗能够很快的输送过去，同时产生较持久的后遗效应，为下面的诱变作了准备。如果不采用这样的砧木，那么初期诱导的时间将会加长，诱变率大大降低，甚至不能形成稳定遗传。接穗之所以选择较小的，是因为较小的接穗表皮通透性较好，药液易渗入生长点细胞，而不会造成过强的传透损伤，同时液避免了dmso的玻璃化诱变作用。

3初诱导和加强诱导：因为licl的诱变作用点是作用于转录过程，也就是作用在dna向rna进行遗传信息的传递上，在这个过程中产生了阻断效应，导致已经存在的某种生理现象的停滞，从而产生正反馈。那么说，我们必须造就这个“已经存在”的生理现象，我们需要的是子球大量增生这个现象，那么根据“激素杠杆”原则，给大量的外源细胞分裂素物质会启动细胞的向芽分化，产生大量的侧芽。其中的初诱导是为了让植物逐步适应细胞分裂素，能够较为稳定的表达细胞分裂素转化/激活的相关蛋白。这个过程必须要加入一定量的naa，使植物整体细胞得到较为均匀的激素激动，并且协调细胞分裂素效应的产生。另外，初诱导能够提高表皮和细胞膜的通透性，为后面的工作奠定了基础。

加强诱导是在初诱导的基础上进行的，在初诱导过程中，kt量尚没有达到峰值，6ba的介入能够在最大程度上调动细胞分裂素相关蛋白的表达，产生高效力芽分化效应。在个同时，需要去掉naa物质，因为初诱导的naa 能够在液泡富集下来，已经足够满足加强诱导的需要了，如果给过多的naa会造成细胞向根分化方向进行，而减弱细胞分裂素效应。

4.诱变：在“已经存在”的生理现象将要产生的时候，可以逐步给诱变剂了，这个时候licl的渗入是缓慢的，尤其是到达细胞核内。这个时候大量的细胞分裂素转化/激动蛋白正在高水平表达，相关的rna正在匆忙的转录，li离子就悄悄的阻断了占优势的rna聚合酶复合体，导致正在高水平转录的rna 无法继续合成，此时细胞质中的相关蛋白合成受阻，随后产生某些细胞信号，反馈给dna，dna随后启动顺式作用元件，启动基因增强子或者产生多拷贝基因同时转录，这种竞争将超过li的拮抗作用，继续表达细胞分裂素相关蛋白。在这个时候我们去掉li离子，那么原有的分裂素基因又被激活，再加上被诱导出来的新的分裂素基因，这样原有的内源分裂素水平就大大提高了。

5.加强诱变：在诱变的最后阶段，会通过负反馈产生大量的细胞分裂素抑制因子，这个时候如果不维持较高的细胞分裂素水平，将会使得已经变化的细胞发生回复现象。随意我们仍然要给足外源细胞分裂素，从而使细胞产生高水平细胞分裂素耐受现象，进而稳定了已经产生的变异。这个时候，由于内源细胞分裂素大量表达，很接近临界点了，所以我们在给加强诱变的激素是必须时刻关注植物的反应情况，一旦发现抑制现象的产生，马上停止激素供给。

6.稳定：由于整个诱变过程是在相当高的细胞分裂素水平进行了，根据“激素杠杆”原理，此时大量的生长素基因被封闭了，植物严重缺乏内源生长素，根系发育不良。这个时候我们就要外源给一定量的生长素，一来可以补充植株体内的生长素缺乏，促进根系的形成，加强植株的营养供给；二来可以正相协调已经产生的大量内源细胞分裂素的作用，稳定细胞分裂素相关蛋白的表达，产生较为稳定的遗传。如果细胞分裂素能够正常发挥作用，组织细胞并未受到破坏，在补充了生长素物质后，植物会回复到高内源细胞分裂素水平的生长阶段，产生了“超级子吹”现象。

7.遗传检测：通过聚丙烯酰胺凝胶电泳dna片断，进行差异显示，溴化乙啶染色。可以对比出来诱变前后同一植株dna片断的差异，说明这种诱变是作用于dna的，可以遗传的。但由于dna的不稳定性和众多反馈机制的存在，这种诱变性状能够稳定多久尚不可测。能够稳定遗传的植株，根据实验和理论推测，应该小于10%。

这就是超级子吹：有刺座必有子球:)
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